IBA-lifesciences

德國IBA GmbH致力于向生命科學(xué)研究提供高質(zhì)量的工具。作為一個 "TAGnology" 公司，IBA是一個合格的學(xué)術(shù)界研究伙伴，是表達(dá)克隆和蛋白質(zhì)純化技術(shù)以及蛋白質(zhì)和核酸遞送技術(shù)的zui前沿的供應(yīng)商之一，其的蛋白質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)覆蓋整個藥物發(fā)現(xiàn)過程。IBAGmbH總部座落于德國的哥廷根，它從2000年開始在世界范圍的市場營銷其產(chǎn)品和服務(wù)。Strep-tag是一個通用的技術(shù)平臺，用于克隆、表達(dá)、一步純化、檢測和分析純的、具有生物學(xué)活性的蛋白質(zhì)。在雙標(biāo)簽蛋白質(zhì)中，作為Strep-tag的*伙伴，IBA還提供6 xHistidine-tag 用以對全長表達(dá)進(jìn)行快速控制，并且由于采用這兩種獨立的純化方法而增加蛋白質(zhì)純度。新技術(shù)MATra ("Magnet Assisted Transfection") 可以有效轉(zhuǎn)染大范圍的細(xì)胞系。MALipofection Enhancer與新的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑IBAfect的組合是一個的“磁力輔助的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染”組合。Streptamer技術(shù)是功能性T細(xì)胞分離的一個突破，它是一種對抗原特異T細(xì)胞進(jìn)行功能性分離和鑒定的新方法。IBA開發(fā)的Twin-Strep-Tag系統(tǒng)用于離析多蛋白質(zhì)復(fù)合體以及鑒定蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。2007年底，IBA隆重推出了組合式克隆的新產(chǎn)品StarGate，用以系統(tǒng)地將任何目的基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌、酵母、哺乳動物等背景細(xì)胞，高速和方便地篩選優(yōu)化的宿主/標(biāo)簽組合。

Strep-tag® / Strep-Tactin®蛋白質(zhì)表達(dá)與純化系統(tǒng) 　　作為后基因組時代表達(dá)克隆和蛋白質(zhì)純化技術(shù)zui重要的供應(yīng)商之一，德國IBA公司開發(fā)了一個稱為Strep-tag的通用技術(shù)平臺。這種快速、合算、多樣性地生產(chǎn)和使用重組蛋白的技術(shù)平臺是IBA與TU Munich的Arne Skerra博士教授密切合作開發(fā)而成。除了圍繞Strep-tag的大型產(chǎn)品組合外，IBA還*提供應(yīng)用該技術(shù)的蛋白質(zhì)生產(chǎn)定制服務(wù)。 　　Strep-tag技術(shù)開發(fā)的原理是*的生物素（biotin）和抗生物素蛋白鏈菌素（streptavidin）之間的結(jié)合反應(yīng)。為了將這種牢固的相互作用用于蛋白質(zhì)純化用途，研究者們發(fā)現(xiàn)需要一個肽，該肽與重組蛋白質(zhì)融合后，能夠結(jié)合在streptavidin的生物素結(jié)合口袋，從而作為純化tag。zui后研究者們成功設(shè)計出一個只由8個氨基酸(Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys)構(gòu)成的短序列并稱之為Strep-tag II。為了優(yōu)化結(jié)合屬性，streptavidin也被設(shè)計成為Strep-Tactin。如此，一對優(yōu)化的結(jié)合伙伴被發(fā)現(xiàn)了：Strep-tag / Strep-Tactin系統(tǒng)現(xiàn)已成為zui被廣泛應(yīng)用的親和層析系統(tǒng)之一。 　　Strep-Tactin與多種不同的基質(zhì)偶聯(lián)，使Strep-tag融合蛋白得以在生理條件下親和純化。與其他tag相比，這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性，并僅經(jīng)一步層析后即可產(chǎn)出超過99%的純度。 

 Strep-Tactin: Engineered streptavidin for optimal binding of a short peptide called “Strep-tag”

 　　Strep-tag®系統(tǒng)可用于從任何表達(dá)系統(tǒng)包括桿狀病毒、哺乳動物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌中純化Strep-tag II蛋白。用于細(xì)菌、哺乳動物細(xì)胞和酵母的表達(dá)載體請參見本欄目相關(guān)章節(jié)。 　　除了表達(dá)載體，IBA還提供圍繞Strep-tag用于蛋白質(zhì)純化、檢測、分析（蛋白質(zhì)固定）、蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用研究以及高通量純化的完整的產(chǎn)品組合。 

The tag技術(shù)蛋白質(zhì)僅8個氨基酸平衡的氨基酸組成 – 對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和活性一般沒有影響高選擇性和易于控制的結(jié)合屬性 C-或N-末端融合無需去除有效和通用的表達(dá)載體，標(biāo)準(zhǔn)化的克隆策略生理條件下的親和層析通過顏色改變可見柱再生和活性狀態(tài)（見下）可獲得超過99%的純度Strep-tag適用于：金屬蛋白膜蛋白具有多個亞單位的敏感蛋白質(zhì)復(fù)合體以及其他任何蛋白質(zhì)

結(jié)合： GFP Strep-tag 蛋白結(jié)合于Strep-Tactin洗脫： 用脫硫生物素再生（顏色控制）： 開始去除脫硫生物素再生： 脫硫生物素被*除去再生： 用平衡緩沖液快速再生

純化在E. coli 中過度表達(dá)的GFP-Strep-tag II 融合蛋白 圖片(從左至右)：1、GFP-Strep-tag II融合蛋白特異結(jié)合在Strep-Tactin SepharoseÒ柱上，而非特異性蛋白質(zhì)被少量生理性洗滌緩沖液迅速洗去。2、由于加入特異性競爭劑脫硫生物素，Strep-tag蛋白被洗脫。3-5、柱再生：脫硫生物素被黃色溶液HABA取代，后者一旦與Strep-Tactin復(fù)合即變?yōu)榧t色。HABA隨后被洗滌緩沖液除去，柱子可被重新使用。 怎樣獲得優(yōu)良無比的純化因素 　　Strep-tag® 純化系統(tǒng)是基于Strep-tag II肽和特殊設(shè)計的Strep-Tactin（streptavidin的變體）之間高選擇性和極易控制的相互作用而建立起來的蛋白純化系統(tǒng)。Strep-tag II對Strep-Tactin的結(jié)合親和力比對streptavidin高將近100倍。在親和純化過程中，附了tag的蛋白質(zhì)結(jié)合在被固定了的Strep-Tactin上。生理緩沖液如PBS可與一系列添加劑一起用于該純化過程。短暫的洗滌步驟之后，在同一緩沖液中加入脫硫生物素（2.5 mM）即可將純化的重組蛋白溫和地洗脫下來。脫硫生物素是一種便宜的、可逆結(jié)合的、穩(wěn)定的生物素類似物，而生物素是streptavidin的天然配體。這種競爭性洗脫是賦予特異性的第二步，從而得到優(yōu)良無比的純化因素。該系統(tǒng)安全、易于使用；純化柱再生和活性狀態(tài)可以通過純化柱上的顏色改變來觀察到。 　　Strep-tag融合蛋白可以經(jīng)Western blots, ELISA, 電子或熒光顯微鏡進(jìn)行方便的檢測。有相應(yīng)的Strep-Tactin酶共軛物和抗Strep-tag II的單克隆抗體供出售。 Strep-tag®II對蛋白質(zhì)的影響可以忽略 　　此8個氨基酸的短肽tag由于具有化學(xué)平衡的氨基酸組成（WSHPQFEK），因此對重組蛋白的影響可以忽略不計。該tag可以被置于C-端或N-端。建議在蛋白和tag之間加入2個氨基酸的間隔以確保tag的可接近性?？偟膩碚f，該tag不干擾蛋白質(zhì)的折疊或生物活性、不與重金屬離子緩沖液雜質(zhì)反應(yīng)、無離子交換屬性、不會誘導(dǎo)蛋白質(zhì)聚集。因此無需去除該tag。 Strep-Tactin®：長效的親和柱 　　Strep-Tactin是streptavidin的一種衍生物，是已知zui穩(wěn)定的蛋白質(zhì)之一。Streptavidin對以8 M urea或guanidine, 0.5 M NaOH以及50 % formamide (t = 1 h; T = 37 °C)的處理保持穩(wěn)定。蛋白酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶和彈性蛋白酶等) 在1:50 w/w比例下，37 °C孵育2小時都無法切割 streptavidin。當(dāng)SDS存在時，僅在溫度高于60 °C時，streptavidin才開始降解成單體。經(jīng)過測試，Strep-Tactin已經(jīng)被證實具有上述作為長效親和柱*的特性，可被重復(fù)使用3-5次。而且，Strep-Tactin的中性PI值使非特異性蛋白質(zhì)或核酸的結(jié)合降到zui低。 Strep-Tactin樹脂技術(shù)指標(biāo) 　　有5種版本Strep-Tactin樹脂，區(qū)別在于其特性和應(yīng)用。Strep-TactinSepharose®優(yōu)先用于重力流層析；Strep-TactinSuperflow®和Strep-TactinMacroPrep®也可用于低壓力或FPLC；Strep-TactinPOROS®(20和50)用于FPLC和HPLC層析。每個基質(zhì)都會表現(xiàn)出不同的非特異性結(jié)合性質(zhì)，當(dāng)使用某種基質(zhì)由于非特異性背景而無法獲得滿意結(jié)果時，建議換用其它的基質(zhì)（亦請見Strep-TactinColumnEvaluationSets）。此外Superflow尤其適用于增加的流速，也適用于大的蛋白質(zhì)復(fù)合物的純化。 
　　請注意，Strep-Tactin樹脂被優(yōu)化用于柱親和層析，而不適用于批量純化。批量純化請使用IBA的MagStrepStrep-Tactin包被的磁珠。 
表1:與Strep-tag/Strep-Tactin相互作用兼容的試劑

試劑濃度Reduction AgentsDTT50 mMβ-mercaptoethanol50 mMNon-Ionic DetergentsC8E4 Octyltetraoxyethylenezui高0.88 %C10E5; Decylpentaoxyethylene0.12 %C10 E60.03 %C12 E80.005 %C12E9; Dodecyl nonaoxyethylene (Thesit)0.023 %DM; Decyl-β-D-maltoside0.35 %LM; N-dodecyl β-D-maltoside0.007 %NG; N-nonyl-β-D-glucopyranoside0.2 %OG; N-octyl-β-D-glucopyranoside2.34 %TX; Triton X-1002 %Tween 202 %Ionic DetergentsN-lauryl-sarcosine2 %8-HESO;N-octyl-2-hydroxy-ethylsulfoxide1,32 %SDS; Sodium-N-dodecyl sulfate0.1 %Zwitter-Ionic DetergentsCHAPS0.1 %DDAO; N-decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.034 %LDAO; N-dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide0.13 %其它Ammonium sulfate (NH4)2SO42 MCaCl2zui高1 MEtha0%EDTA50 mMGuanidinezui高1 MGlycerolzui高25 %Imidazolezui高250 mMMgCl21 MNaCl5 MUreazui高1 M

注意：這些試劑在高達(dá)上述濃度下已成功用于純化如GAPDH-Strep-tagÒ。未標(biāo)注“zui高”的試劑，也許可以使用更高濃度。由于結(jié)合依賴于Strep-tag在特殊蛋白質(zhì)中的空間可及性，所給的濃度值對于其他蛋白質(zhì)可能有偏差。 Strep-Tactin®Sepharose® 　　Strep-Tactin Sepharose提供高結(jié)合容量和zui低的非特異結(jié)合（見下圖），可用于重力流純化。由于Strep-Tactin樹脂經(jīng)過優(yōu)化適于柱親和層析，而不適于批量純化，因此推薦使用預(yù)裝的Strep-Tactin Sepharose柱。該純化柱有多種形式，從0.2 ml迷你柱到10 ml柱。 

Strep-Tactin Sepharose樹脂技術(shù)指標(biāo)：

Strep-Tactin濃度：5 mg/ml 沉積樹脂結(jié)合容量：1 ml沉積樹脂可一步法純化50-100 nmol 重組蛋白(多達(dá)3 mg 30 KDa蛋白質(zhì))支持介質(zhì)：Sepharose 4FF, 4 % agarose珠子大小45 - 165 µm線性流動速率：重力流排阻極限：3 x 107 Da形式：50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl穩(wěn)定性：室溫運(yùn)輸后能保存至少6個月保存：4 °C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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目錄號產(chǎn)品說明規(guī)格供應(yīng)商2-1202-550重力流Strep-Tactin Sepharose迷你柱（0.2 ml柱床體積）5 柱IBA2-1202-001重力流Strep-Tactin Sepharose柱（1 ml柱床體積）1 柱IBA2-1202-0505 柱IBA2-1202-051重力流Strep-Tactin Sepharose柱（5 ml柱床體積）1 柱IBA2-1202-101重力流Strep-Tactin Sepharose柱（10 ml柱床體積）1 柱IBA2-1201-002Strep-Tactin Sepharose (50 %懸浮)4 mlIBA2-1201-01020 mlIBA2-1201-02550 mlIBA2-1201-100200 mlIBA2-1201-5001000 mlIBA

  Strep-Tactin® Superflow® 　　Strep-TactinSuperflow具有*的機(jī)械穩(wěn)定性、的流動特性以及高動態(tài)結(jié)合容量，可以用于重力流和FPLC，適用于增加的流動速率及純化大的蛋白復(fù)合物（見下圖特殊用途）。 
　　由于Strep-Tactin樹脂經(jīng)過優(yōu)化適合柱親和純化而不適于批量純化，因此推薦使用預(yù)填裝的Strep-TactinSuperflow柱。柱具有多種規(guī)格（從0.2ml迷你柱至10ml柱），是為重力流而設(shè)計。若為更方便的用途如FPLC所用，Strep-TactinSuperflow尚有預(yù)填裝的cartridges。 Strep-Tactin Superflow樹脂技術(shù)指標(biāo)：

結(jié)合容量：1 ml沉積樹脂（對應(yīng)于2 ml 50 % 懸浮液）可用以一步純化50-100 nmol重組蛋白（高達(dá)3 mg 30 kDa蛋白質(zhì)）支持介質(zhì)：Superflow 6 (6 % agarose，交聯(lián))珠子大小：60-160 µm，球形線性流動速率：推薦100-300 cm/h用于純化Strep-tag蛋白形式(bulk)50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA穩(wěn)定性：室溫運(yùn)輸后可以保存6個月保存：4°C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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目錄號產(chǎn)品說明規(guī)格供應(yīng)商2-1207-550重力流Strep-Tactin Superflow迷你柱（0.2 ml柱床體積）5 柱IBA2-1207-001重力流Strep-Tactin Superflow柱（1 ml柱床體積）1柱IBA2-1207-0505 柱IBA2-1207-051重力流Strep-Tactin Superflow柱（5 ml柱床體積）1柱IBA2-1207-101重力流Strep-Tactin Superflow柱（10 ml柱床體積）1柱IBA2-1211-001Strep-Tactin Superflow cartridge（1 ml柱床體積）1 cartridgeIBA2-1211-050Strep-Tactin Superflow cartridge（1 ml柱床體積）5 cartridgesIBA2-1212-001Strep-Tactin Superflow cartridge（5 ml柱床體積）1 cartridgeIBA2-1212-050Strep-Tactin Superflow cartridge（5 ml柱床體積）5 cartridgesIBA2-1206-002Strep-Tactin Superflow (50 % suspension)4 mlIBA2-1206-01020 mlIBA2-1206-02550 mlIBA2-1206-100200 mlIBA2-1206-5001000 mlIBA

 Strep-Tactin® MacroPrep® 　　Strep-Tactin MacroPrep適合所有低壓力層析應(yīng)用。MacroPrep樹脂展現(xiàn)與Sepharose®或Superflow®不同的非特異結(jié)合性質(zhì)，因此當(dāng)采用Sepharose®或Superflow®無法獲得優(yōu)化結(jié)果時，推薦使用MacroPrep樹脂，反之亦然（見下圖）。由于Strep-tag純化系統(tǒng)是為柱親和層析而非批量純化而設(shè)計，因此推薦使用我們預(yù)裝的Strep-Tactin MacroPrep裝置用于柱層析。　　重力流柱具有多種規(guī)格，柱床體積分別為0.2 ml、1 ml、5 ml和10 ml，使用時無需任何進(jìn)一步的特殊設(shè)備。Strep-Tactin MacroPrepcartridges是預(yù)填裝的即用型層析柱，可以方便地與注射器、蠕動泵層析系統(tǒng)或FPLC / HPLC工作站一起使用，以在低壓力條件下快速、全自動的純化Strep-tag融合蛋白。 　　Strep-Tactin MacroPrep cartridges有1 ml和5 ml并且可以串聯(lián)以擴(kuò)大吸附容量。IBA也供應(yīng)螺紋入口和出口的接頭。1 ml Strep-Tactin MacroPrepcartridges的平均吸附容量是每次50-100 nmol重組Strep-tag融合蛋白，推薦的流動速率為1 ml / minute (大約相當(dāng)于使用注射器時每分鐘20滴)。 Strep-Tactin MacroPrep樹脂技術(shù)指標(biāo)：

結(jié)合容量：1 ml沉積樹脂(相當(dāng)于2 ml 50 % 的懸浮液) 可用于一步純化50-100 nmol重組蛋白支持介質(zhì)：MacroPrep® 50 (polymethacrylate)珠子大小：50 µm線性流動速率：高達(dá)300 cm/h可用于Strep-tag純化形式(bulk)：50 % suspension in 100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1mM EDTA, 150 mM NaCl穩(wěn)定性：運(yùn)輸后可以保存6個月保存：4 °C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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 Strep-Tactin® POROS®  　　Strep-Tactin POROS優(yōu)化組合了高流動速率、高選擇性結(jié)合和高動態(tài)容量（見下圖），可用于FPLC或HPLC以快速純化Strep-tag蛋白。Strep-Tactin POROS 20的珠子大小為20 µm，而POROS 50的珠子大小為50 µm，但其結(jié)合容量相同。由于Strep-Tactin樹脂經(jīng)過優(yōu)化適合柱親和純化，而不適于批量純化，因此推薦使用預(yù)裝的1.7 ml的Strep-Tactin POROS柱用于FPLC和HPLC。請注意：POROS 的結(jié)合容量只有Strep-Tactin Sepharose、Superflow和MacroPrep的一半左右；POROS不被推薦用于膜蛋白純化。  Strep-Tactin POROS樹脂技術(shù)指標(biāo)：

結(jié)合容量：1.7 ml柱可用于一步法純化40-80 nmol重組蛋白支持介質(zhì)：POROS 20或POROS 50珠子大小20 µm或50 µm線性流動速率：300 - 500 cm/h可用于 Strep-tag純化形式 (bulk)50 % 懸浮在100 mM Tris/HCl pH 8.0, 1mM EDTA, 150 mM NaCl穩(wěn)定性：運(yùn)輸后至少6個月保存：4 °C，不能凍存運(yùn)輸：室溫

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目錄號產(chǎn)品說明規(guī)格供應(yīng)商2-1203-017即用型Strep-Tactin POROS 20柱（1.7 ml柱床體積）1 柱IBA2-1205-017即用型Strep-Tactin POROS 50柱（1.7 ml柱床體積）1 柱IBA2-1203-001Strep-Tactin POROS 20 (50 %懸浮)2 mlIBA2-1203-0024 mlIBA2-1203-00510 mlIBA2-1203-01020 mlIBA2-1205-001Strep-Tactin POROS 50 (50%懸浮)2 mlIBA2-1205-0024 mlIBA2-1205-00510 mlIBA2-1205-01020 mlIBA

Strep-Tactinâ 離心柱（Spin Columns）——用于快速平行純化Strep-tagâ蛋白 l 10分鐘之內(nèi)純化多達(dá)150 ug Strep-tag蛋白 l 即用型離心柱 l 快速平行處理多個樣本 l 非常合算 　　為了快速、易于操作的蛋白質(zhì)平行純化，IBA提供多用途的Strep-Tactin 離心柱以填補(bǔ)Strep-Tactin重力流柱與以96孔形式高通量純化的Strep-Well HT純化微孔板之間的空缺。 Strep-Tactin 離心柱技術(shù)指標(biāo)

產(chǎn)品說明：即用型帶有固定好的Strep-Tactin的離心柱，用于從小規(guī)模表達(dá)培養(yǎng)物中快速純化Strep-tag蛋白形式（柱）：50個預(yù)填裝離心柱和接收管。用前需以Buffer W (100 mM Tris / HCl pH8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl) 將離心柱重新水化和激活。結(jié)合容量：多達(dá)150 ug Strep-tag II融合蛋白穩(wěn)定性：運(yùn)輸后6個月貯存：4°C運(yùn)輸：室溫

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目錄號產(chǎn)品名稱規(guī)格供應(yīng)商2-1800-000Strep-Tactin Spin Column kit1 kitIBA2-1850-050Strep-Tactin Spin Columns50 columnsIBA

Strep-Tactin Spin Column kit包含50個spin柱，收集管，洗滌緩沖液，洗脫緩沖液和對照質(zhì)粒。 表達(dá)載體 Tet和T7表達(dá)系統(tǒng) Tet表達(dá)系統(tǒng) 特點和優(yōu)點：

以pASK-IBA載體在大腸桿菌中高水平表達(dá) 由于tet啟動子而使表達(dá)受到緊密調(diào)控 增加細(xì)胞毒性基因的穩(wěn)定性 通用的克隆策略，只需一個限制性內(nèi)切酶 N-端或C-端Strep-tag II融合 N-端或C-端6xHistidine-tag融合 Strep-tag II/6xHistidine-tag雙標(biāo)記載體 胞液或外周胞質(zhì)中表達(dá) 無水四環(huán)素（anhydrotetracycline，AHT）誘導(dǎo)表達(dá) 氨卞青霉素或氯霉素抗性

 原理和特性：　　pASK-IBA載體與受緊密調(diào)控的tet啟動子一起工作。tet抑制子在pASK-IBA質(zhì)粒上編碼，并分別從beta-內(nèi)酰胺酶啟動子或氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶啟動子組成型表達(dá)。這種特殊的安排保證了抑制分子和質(zhì)?？截悢?shù)之間平衡的化學(xué)計量。在低濃度無水四環(huán)素的有效化學(xué)誘導(dǎo)下，外源基因表達(dá)受到的嚴(yán)格抑制才得以解除。與lac啟動子（有漏洞、易受分解代謝產(chǎn)物（cAMP水平，代謝狀態(tài)）的抑制以及受染色體編碼的抑制分子的影響）相比，tetA啟動子/操縱子受到緊密調(diào)控，不與任何細(xì)胞調(diào)節(jié)機(jī)制或遺傳背景有功能上的偶聯(lián)。　　因此，無需特殊大腸桿菌菌株或額外質(zhì)粒，多種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下都可以應(yīng)用。例如，葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基甚至XL 1-Blue菌株（攜帶四環(huán)素抗性基因的一個附加拷貝），也可用于表達(dá)。pASK-IBA表達(dá)系統(tǒng)在發(fā)酵等多種條件下非常穩(wěn)定，操作方便?！　〖?xì)胞質(zhì)pASK-IBA載體現(xiàn)以“plus”版本提供。這種新版本包含改良的翻譯起始位點以增加一級蛋白質(zhì)產(chǎn)量，而“plus”載體（如pASK-IBA3plus）的其余序列與其“非plus”前體（如pASK-IBA3）相同。“非plus”版載體從現(xiàn)在開始僅按需供應(yīng)?！　≥d體的更多元件包括一個前后串聯(lián)的核糖體結(jié)合位點（RBS），保證翻譯的有效起始；脂蛋白基因的強(qiáng)終止子，以避免通讀；噬菌體f1的基因間區(qū)域，以提供一種制備單鏈DNA的方法；以及一個beta-內(nèi)酰胺酶或氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶基因*。這些載體均不介導(dǎo)抗四環(huán)素抗性。 *使用帶beta-內(nèi)酰胺酶抗性基因的克隆載體可能會有某些局限性，因為氨芐青霉素在細(xì)菌培養(yǎng)基里降解的相當(dāng)快。因此，我們現(xiàn)在以氯霉素抗性取代氨芐青霉素抗性供應(yīng)Strep-tag II載體pASK-IBA2C至pASK-IBA7C。 參考文獻(xiàn):
Skerra, A. (1994). Use of the tetracycline promoter for the tightly regulated production of a murine antibody fragment in Escherichia coli. Gene, 151, 131-135. 　　以下大腸桿菌菌株已與pASK-IBA載體一起成功用于Tet表達(dá)：JM83, WK6, B, BL21, MG1655, W3110, BL21(DE3), BLR(DE3), XL1-Blue, BL21-CodonPlusTM-RIL 　　對于分泌型蛋白，我們推薦JM83。對于胞質(zhì)表達(dá)我們推薦大腸桿菌B菌株，因為它們?nèi)狈﹄x子蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，后兩者能在純化過程中降解蛋白質(zhì)（Grodberg and Dunn, 1988, J.Bacteriol. 170, 1245）。請注意我們不知道有與Tet表達(dá)系統(tǒng)不兼容的大腸桿菌菌株。 無水四環(huán)素：tetA啟動子誘導(dǎo)劑 　　Strep-tag/Strep-Tactin 過度表達(dá)系統(tǒng)的大腸桿菌表達(dá)框受tetA啟動子/操縱子和抑制子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。啟動子被低濃度無水四環(huán)素（AHT）誘導(dǎo),既節(jié)省費(fèi)用也使AHT的抗菌影響降到zui低。Degenkolb 等 (1991) 研究表明，AHT 對tet抑制子的結(jié)合比四環(huán)素對tet抑制子的結(jié)合緊密35倍。參考文獻(xiàn):
Degenkolb J, Takahashi M, Ellestad GA, Hillen W, 1991:Antimicrob. Agents Chemother. 35, No 8, 1591-1595 Structural requirements of tetracycline-Tet repressor interaction: Determination of equilibrium binding constants for tetracycline analogues with the Tet repressor. T7表達(dá)系統(tǒng) 特點和優(yōu)點：

以pPR-IBA載體通過噬菌體T7啟動子高水平表達(dá) 在BL21菌株中，在T7 RNA polymerase作用下高水平轉(zhuǎn)錄 無毒蛋白高水平表達(dá) IPTG誘導(dǎo) N-端或C-端導(dǎo)入Strep-tag II標(biāo)簽 適合體外轉(zhuǎn)錄和翻譯

原理和特性： 　　Tet啟動子具有中等強(qiáng)度，可以導(dǎo)致某些蛋白質(zhì)的高水平表達(dá)（取決于如折疊速度和穩(wěn)定性等難以預(yù)測的特性）。但是有些蛋白質(zhì)只有經(jīng)強(qiáng)啟動子的轉(zhuǎn)錄才能高水平表達(dá)。在這些情況下我們推薦使用T7啟動子?！　7表達(dá)系統(tǒng)在pPR-IBA載體上編碼，該系統(tǒng)采用T7啟動子和T7 RNA聚合酶以使目標(biāo)基因高水平轉(zhuǎn)錄。目標(biāo)基因的表達(dá)受到宿主細(xì)胞中T7 RNA 聚合酶的誘導(dǎo)。這一點可以通過使用大腸桿菌BL21來實現(xiàn)。E. coli BL21染色體上含有T7 RNA 聚合酶基因，該基因受lacUV5啟動子控制；而該啟動子受IPTG誘導(dǎo)。 查詢多克隆位點請瀏覽http://www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/naps/naps_fr01_02.html 載體序列可從www.iba-biotagnology。。ｃｏｍ/download.html 下載 用于在大腸桿菌中表達(dá)的載體 Strep-tagÒ 載體概覽： 　　IBA提供多種用于在大腸桿菌中表達(dá)的pASK-IBA載體以便攜帶有Strep-tag的重組蛋白表達(dá)。除了抗生素抗性基因（AmpR, CamR），pASK-IBA載體僅在XbaI和HindIII限制性酶切位點之間有區(qū)別。其區(qū)別如下圖所示：您可以在N-或C-端標(biāo)簽之間、細(xì)胞質(zhì)外周表達(dá)或細(xì)胞質(zhì)表達(dá)之間和/或用以去除標(biāo)簽的內(nèi)蛋白酶切割位點（Factor Xa, enterokinase, thrombin 和 TEV protease）之間作選擇。請注意，通常無須去除標(biāo)簽。 雙標(biāo)簽和6xHistidine-tag載體概覽： 　　除了Strep-tagÒ 載體，IBA還提供帶有Strep-tag和6xHistidine-tag的雙標(biāo)簽載體以及6xHistidine-tag載體。一個蛋白質(zhì)上的兩個不同標(biāo)簽?zāi)墚a(chǎn)生zui高的純化因素，使得可以在變性或生理條件下純化全長蛋白質(zhì)。而且，直接從培養(yǎng)基開始的純化操作可以被優(yōu)化?！　≥d體僅在XbaI和HindIII限制性酶切位點之間有區(qū)別。 哺乳動物表達(dá)載體 　　IBA的pEXPR-IBA載體是專為哺乳動物細(xì)胞中高水平表達(dá)和純化重組Strep-tagÒ和/或 6xHistidine-tag融合蛋白而設(shè)計的。這些載體的克隆策略相同，因而與相應(yīng)的細(xì)菌pASK-IBA質(zhì)粒相兼容。因此，一個PCR片段可以被平行克隆進(jìn)pASK-IBA及其相等的pEXPR-IBA。人巨細(xì)胞病毒(CMV)立早啟動子在很多哺乳動物細(xì)胞中提供強(qiáng)表達(dá)。為了延長在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中表達(dá)的時間，載體會在潛伏感染了SV40大T-抗原（如COS7）的細(xì)胞系中復(fù)制。此外，新霉素抗性基因可以允許直接篩選穩(wěn)定的細(xì)胞系。 

pEXPR-IBA 特點益處Strep-tag II采用Strep-Tactin基質(zhì)純化重組蛋白CMV 立早啟動子/增強(qiáng)子在多種哺乳動物細(xì)胞中高水平表達(dá)多克隆位點插入目標(biāo)基因并與Strep-tag和/或6xHistidine-tag融合。與pASK-IBA載體兼容新霉素抗性基因在哺乳動物細(xì)胞中篩選穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子氨卞青霉素抗性基因在E. coli中篩選pUC復(fù)制起始位點在E. coli中高拷貝復(fù)制BM40 (僅見于pEXPR-IBA42 和44 )使蛋白質(zhì)分泌進(jìn)培養(yǎng)基中Factor Xa, thrombin (thb), enterokinase (ent) ,TEV protease (TEV)切割位點如果需要可以除去Strep-tag（一般不需要）

 用于在酵母中表達(dá)的載體 　　IBA現(xiàn)供應(yīng)兩種帶有Strep-tagÒ和瑞士Dualsystems Biotech AG（www.dualsystmes。。ｃｏｍ）的HA epitope-tag的酵母載體。 特點： l 高水平、可誘導(dǎo)的表達(dá) l 無需加入用于誘導(dǎo)的試劑或改變培養(yǎng)基 l 誘導(dǎo)受緊密調(diào)控使表達(dá)毒性蛋白質(zhì) 載體pKS1-ST和pKS2-ST組合了蛋白質(zhì)表達(dá)的兩個重要特點： l 可誘導(dǎo)的ADH2啟動子：ADH2啟動子受培養(yǎng)基中葡萄糖缺失的誘導(dǎo)。在早期生長過程中，葡萄糖充裕，啟動子無活性，因此防止對酵母生長的負(fù)效應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞到達(dá)靜止早期時，葡萄糖被培養(yǎng)基耗盡，ADH2啟動子被誘導(dǎo)，產(chǎn)生大量蛋白質(zhì)。 l KanMX表達(dá)框：不象其他酵母表達(dá)載體，pKS-ST載體*一個KanMX表達(dá)框，使得可以在豐富培養(yǎng)基中以G418篩選。豐富培養(yǎng)基如YPD的使用將顯著增強(qiáng)細(xì)胞密度和蛋白質(zhì)產(chǎn)量。 比較所有Strep-tagÒ, 6´Histidine-tag及double-tag載體 

質(zhì)粒Strep-tag6xHis -tagHA epitope-tag分泌Tag去除蛋白酶抗性目錄號大腸桿菌載體:具有tet啟動子用于胞質(zhì)外周表達(dá)pASK-IBA2C-端--YesNo-Amp2-1301-000pASK-IBA4N-端--YesNo-Amp2-1303-000pASK-IBA6N-端--YesYesfactor XaAmp2-1305-000pASK-IBA12N-端--YesYesthrombinAmp2-1311-000pASK-IBA14N-端--YesYesenterokinaseAmp2-1313-000pASK-IBA32-C-端-YesNo-Amp2-1332-000pASK-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp2-1344-000大腸桿菌載體:具有tet啟動子用于細(xì)胞質(zhì)表達(dá)pASK-IBA3plusC-端--NoNo-Amp2-1402-000pASK-IBA5plusN-端--NoNo-Amp2-1404-000pASK-IBA7plusN-端--NoYesfactor XaAmp2-1406-000pASK-IBA13plusN-端--NoYesthrombinAmp2-1412-000pASK-IBA15plusN-端--NoYesenterokinaseAmp2-1414-000pASK-IBA17plusN-端--NoYesTEV proteaseAmp2-1416-000pASK-IBA33plus-C-端-NoNo-Amp2-1433-000pASK-IBA35plus-N-端-NoNo-Amp2-1435-000pASK-IBA37plus-N-端-NoYesfactor XaAmp2-1437-000pASK-IBA43plusC-端N-端-NoNo-Amp2-1443-000pASK-IBA45plusN-端C-端-NoNo-Amp2-1445-000pASK-IBA63a-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-100pASK-IBA63b-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-200pASK-IBA63c-plusC-端--NoNo-Amp2-1463-300pASK-IBA65b-plusN-端--NoNo-Amp2-1465-200大腸桿菌載體:具有tet啟動子和氯霉素抗性（CAT）pASK-IBA2CC-端--YesNo-CAT2-1321-000pASK-IBA3CC-端--NoNo-CAT2-1322-000pASK-IBA4CN-端--YesNo-CAT2-1323-000pASK-IBA5CN-端--NoNo-CAT2-1324-000pASK-IBA6CN-端--YesYesfactor XaCAT2-1325-000pASK-IBA7CN-端--NoYesfactor XaCAT2-1326-000大腸桿菌載體:具有T7啟動子pPR-IBA1C-端--NoNo-Amp2-1390-000pPR-IBA2N-端--NoNo-Amp2-1391-000哺乳動物載體：具有人CMV啟動子pEXPR-IBA3C-端-NoNo-Amp/Neo2-1903-000pEXPR-IBA5N-端-NoNo,-Amp/Neo2-1905-000pE, XPR,, , ,, -I, B, A7<, /DIV>N-端-NoYesfactor XaAmp/Neo2-1907-000pEXPR-IBA13N-端-NoYesthrombinAmp/Neo2-1913-000pEXPR-IBA15N-端-NoYesenterokinaseAmp/Neo2-1915-000pEXPR-IBA17N-端-NoYesTEV proteaseAmp/Neo2-1917-000pEXPR-IBA42C-端N-端-YesNo-Amp/Neo2-1942-000pEXPR-IBA43C-端N-端-NoNo-Amp/Neo2-1943-000pEXPR-IBA44N-端C-端-YesNo-Amp/Neo2-1944-000pEXPR-IBA45N-端C-端-NoNo-Amp/Neo2-1945-000酵母載體：具有ADH2啟動子pKS1-STN-端-N-端NoNo-Amp/G4182-3801-000pKS2-STN-端-N-端YesNo-Amp/G4182-3802-000

每個載體的規(guī)格：5ｕg 

產(chǎn)品規(guī)格目錄號測序引物pASK-IBA載體：上游測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-101pASK-IBA載體：下游測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-102pASK-IBA載體：上、下游測序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-104pPR-IBA載體：上游測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-111pPR-IBA載體：下游測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-112pPR-IBA載體：上、下游測序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-114pEXPR-IBA載體：上游測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-121pEXPR-IBA載體：下游測序引物1nmol, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-122pEXPR-IBA載體：上、下游測序引物1nmol each, 10pmol/ul, HPLC純化5-0000-124