worthington LS004200說明書

來源：溶組織梭菌

IUB：3.4.24.3

膠原酶原料認證

粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種同工型，一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的組合可有效分解細胞間基質，這是組織解離的重要部分。該復合物的一個成分是水解酶，它優先在序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 鍵處降解天然膠原蛋白中的螺旋區域，其中 Y 最常見的是中性氨基酸。這種切割產生對進一步肽酶消化敏感的產物。粗膠原酶被半胱氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但 DFP 不抑制。它也被一種大的血漿糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。鈣²⁺是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜已與獲得研究細胞的組織相關（或與放置細胞的用途相關），并且作為相關性的結果，Worthington 已經建立了幾種類型的粗膠原酶：類型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有低水平的二級蛋白酶。
• 4 型被設計成胰蛋白酶活性特別低，以限制對膜蛋白和受體的損害。
• 5 型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為 2:1。設計為相對于 I 型 ( col  G)富含 II 型 ( col  H) 膠原酶。
• 7 型膠原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。

•純化的膠原酶，代碼：CLSPA，含有最少的二次蛋白水解活性和高膠原酶活性。

Worthington 還提供預包裝形式的每種類型的 0.22µm 過濾制劑，用于直接重組和用于細胞分離和培養程序。酶類型和不同組織的有效性之間的相關性很好，部分原因是使用的可變參數。然而，大多數研究人員認為粗膠原酶批次的組織分型是一項有價值的服務。Worthington 膠原酶和污染物檢測的詳細說明可在Worthington 酶手冊中找到。此外，組織特異性參考和詳細的分離條件可以在Worthington 組織分離指南中找到。

膠原酶測定是Mandl的改進，其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時，并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法測定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶微摩爾亮氨酸表示。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶促原代細胞分離和組織解離程序。大多數研究人員要么使用粗制膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與二級酶如彈性蛋白酶、透明質酸酶等結合。為了獲得最佳結果，必須針對要解離的組織調整蛋白水解活性的精確混合。不同組織的類型和有效性之間的相關性很好，并且可能部分取決于使用參數和目標以及批次間的差異。如需更多信息，請參閱膠原酶取樣程序信息。Worthington 還出版了組織分離指南它提供了有關用于這些應用的酶的更多信息以及多種細胞和組織類型的具體參考。

單位定義：一個單位在 37°C、pH 7.5 下 5 小時內從膠原蛋白中釋放 1 微摩爾 L-亮氨酸當量

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